V chemii, biologii a medicíně je pipeta typickým laboratorním nástrojem používaným k dodávání předem stanoveného objemu kapaliny, často jako dávkovač médií. Úspěch výsledků pipetování závisí na tom, jak přesně odečítáte objem pipety při provádění jemných studií. Použití přesných a vysoce kvalitních přístrojů je nejlepším způsobem, jak zajistit, aby byly objemy pipet odečteny správně. Vzhledem k tomu, že požadavky laboratoří na přesnost a preciznost se neustále zvyšují, pochopení a zdokonalení ideálních pipetovacích technik je zásadní.
Pipety se používají ve vědeckém výzkumu a vyžadují vysokou přesnost pro správné měření a přenos malého množství kapaliny.
Příčinou chyb měření pipety však může být porucha zařízení nebo chyba obsluhy. Jakékoli změny v dávkovaném objemu mohou mít dopad na výsledky a reprodukovatelnost experimentů, jako jsou experimenty qPCR.
Faktory ovlivňující přesnost pipety:
Teplota
Na přesné pipetování má velký vliv teplota. Rozdíl teplot mezi podávacím zařízením a kapalinou je nejvlivnějším faktorem. Ke specifickým účinkům tepelné roztažnosti dochází ve vzduchové mezeře (objem mrtvého vzduchu) mezi povrchem kapaliny a pístem. Kromě jiných důsledků to může snížit nebo zvýšit množství kapaliny nasáté do špičky.
Hustota
Množství kapaliny nasáté do hrotu je ovlivněno hustotou (poměr hmotnost/objem). Nasává se méně hustší kapalina než podobný postup s použitím vody. U méně hustých kapalin jsou výsledky opačné. To je způsobeno pružným objemem mrtvého vzduchu a zemskou gravitací. Hustota kapaliny se také mění s teplotou. Typicky se hustota kapaliny také mění s teplotou. Při teplotě 20 stupně /68 stupňů F má voda obvykle hustotu 0,998 kg/dm3, etanol má hustotu 0,79 kg/dm3 a kyselina sírová (95-98 % h2SO4) má hustotu 1,84 kg/dm3.
Vysoký
Přesnost je ovlivněna tlakem vzduchu a geografickou nadmořskou výškou. Čím vyšší je nadmořská výška, tím nižší je tlak vzduchu a tím nižší je konverzní faktor.
Kromě toho body varu některých kapalin výrazně klesají na teplotu blízkou pokojové teplotě, čímž se značně zvyšují ztráty odpařováním.
Odpařování činidla
Vysoce těkavá činidla absorbují páru, která vstupuje do hrotu a zvyšuje vnitřní tlak. Proto dochází k chybám, když je kapalina vytlačována v důsledku zvýšeného tlaku.
Byl zvolen nesprávný režim pipetování
Během pipetování se operátoři často náhodně nebo subjektivně rozhodují, zda použít zpětný nebo dopředný režim. Reverzní režim by však měly používat pouze viskózní vzorky. V obráceném režimu je plunžr zcela stlačen (za první zarážkou), aby se nasál vzorek, a poté pouze částečně stlačen (k první zarážce), aby se vzorek vydal. Proto použití dopředného režimu s viskózními kapalinami bude mít za následek nedostatečnou dodávku, zatímco použití zpětného režimu s vodnými roztoky bude mít za následek nadměrné dodání.
Pipetování nakloněním
Ke ztrátě vzorku dochází, když se špička pipety během aspirace dotkne stěny nádobky. Navíc při pipetování malých objemů může vytahování pipety pod úhlem způsobit změny objemu v důsledku účinků povrchového napětí. Vytažení pipety přímo z nádobky snižuje chyby.