V experimentech buněčné kultury se pipety používají velmi často a přesnost jejich operace přímo ovlivňuje spolehlivost a opakovatelnost experimentálních výsledků. Níže je uvedeno několik tipů pro provoz pipety v buněčné kultuře, o nichž doufám, že bude pro váš experiment užitečné.
1. Vyberte pravou pipetu a tip
- Výběr pipety: Vyberte pravou pipetu podle objemu kapaliny, která má být přenesena. Normální rozsah provozního objemu většiny pipet je 10-100% uvedeného rozsahu. Snažte se zabránit nastavení objemu pipety na méně než 10% maximálního objemu a použít pipetu pro malou řadu pro pipetovací operace s malým objemem.
- Výběr špičky: Vyberte tip, který odpovídá pipetě a ujistěte se, že špička je pevně vložena, aby nedošlo k úniku vzduchu. Kromě toho by pro konkrétní experimenty (jako je aseptický provoz) měly být vybrány autoklávované tipy.
2. opláchněte špičku
Opláchněte tip 2-3 časy za vzniku homogenního filmu na špičce, čímž se zlepší přesnost pipetů. Kromě toho může neutralizovat kapilární účinek v mikropipetách, což může způsobit, že teplota uvnitř špičky konzistentní s teplotou vzorku pro velké objemové pipety. Je třeba poznamenat, že opláchnutí může mít nepříznivý dopad na výsledky při pipetovacích horkých a studených řešeních.
3. řídit rychlost aspirace a výdeje
- Hladké lisování: Stiskněte a uvolněte ovládací tlačítko hladce a nepřetržitě, spíše než stiskněte a uvolňujte jej náhle. To se může vyhnout tvorbě bublin a zlepšit přesnost pipetů.
- Pauza: Po aspiraci kapaliny nechte špičku v kapalině asi 1 sekundu, zejména pro ty viskózní kapaliny. Okamžitě vytažení špičky může vést k neúplné aspiraci kapaliny.
4. Věnujte pozornost hloubce ponoření špičky
- MicroPipette: Tip by měl být ponořen 2-3 mm.
- Pipette s velkým rozsahem: Hloubka ponoření by měla být 5-6 mm. Pokud je špička ponořena příliš hluboko, bude vzduch uvnitř špičky stlačen, což způsobí aspirováno příliš mnoho kapaliny. Zbývající kapalina na povrchu špičky může také ovlivnit výsledky.
5. Vertikální provoz
Ponořte pipetu do vzorku co nejvíce, nejlépe bez odchylky od vertikální polohy o více než 20 stupňů. Kromě zlepšení přesnosti objemu pipety to může také zabránit proudění kapaliny do pipety kvůli nadměrnému naklápění.
6. Sledujte špičku pipety
Při přípravě na vypouštění kapaliny věnujte pozornost tomu, zda jsou k povrchu špičky pipety připojeny nadbytečné kapičky. Po propuštění kapaliny lze špičku špičky pipety dotknout na stranu kontejneru, aby se zajistilo, že výtok je dostatečně důkladný, aby se zabránilo poslední kapce kapaliny zbývající na špičce špičky pipety.
7. Vyberte příslušnou metodu pipetů
- Pozitivní sací metoda: Vhodné pro většinu tekutin. Při sání kapaliny stiskněte tlačítko na první bod zastavení a poté pomalu uvolněte tlačítko a vraťte se do výchozího bodu. Poté stiskněte tlačítko na první bod zastavení, abyste kapalinu vypustili, na chvíli se pozastavte a nadále stiskněte tlačítko na druhý bod zastavení, abyste vyhodili zbývající kapalinu. Nakonec uvolněte tlačítko.
- Zpětná sací metoda: Vhodné pro vysoce viskózní kapaliny, biologicky aktivní kapaliny, snadno pěnivé kapaliny nebo extrémně malé množství kapalin. Nejprve nasává kapalinu více než rozsah set a při přenášení kapaliny nevyfukujte zbývající kapalinu.
8. Udržujte pipetu čistou a udržovanou
- Pravidelná kalibrace: Po používání pipety po určitou dobu je třeba ji kalibrován, aby byla zajištěna její přesnost.
- Čištění: Po každém použití by měla být pipeta včas vyčištěna, aby se zabránilo zbytkové kapalině při kontaminu dalšího experimentu.
9. Aseptická operace
V buněčné kultuře je aseptická operace velmi důležitá. Při používání pipety věnujte pozornost následujícím bodům:
- Dezinfekce: Před použitím otřete pipetu a špičku alkoholovou bavlněnou koulí pro dezinfekci.
- Vyvarujte se křížové kontaminace: Pro každý vzorek použijte nový tip, abyste se vyhnuli křížové kontaminaci.
S výše uvedenými tipy můžete použít pipety pro experimenty buněčné kultury přesněji a efektivněji a zlepšit spolehlivost a opakovatelnost experimentálních výsledků. Doufám, že vám tyto tipy pomohou!